Cyanine3.5 HZ Cy3.5-酰肼：酮醛基团特异性荧光标记综述

产品基本信息

中文名称：花青素Cy3.5-酰肼

英文名称：Cyanine3.5 Hydrazide / Cy3.5-HZ

分子量：约554（游离碱形式）

纯度规格：≥95%

外观性状：深红色至紫色固体

光谱特性：Ex约570-580 nm，Em约590-620 nm

溶解性：可溶于氯仿、甲醇、乙腈、DMF等有机溶剂，微溶于水

储存条件：-20℃避光、干燥、密封保存

产品基本介绍

Cy3.5-酰肼是一款酮醛基团特异性荧光标记试剂。分子的核心是Cy3.5花菁荧光团，末端修饰酰肼基团（–CONHNH₂）。酰肼与醛基或酮基在温和条件下发生缩合反应，形成稳定的腙键（hydrazone）。这一反应的核心优势在于化学选择性——酰肼不与生物分子中常见的氨基、羧基、羟基、巯基发生反应，仅靶向羰基（醛/酮）。

Cy3.5的光谱位置介于Cy3和Cy5之间，发射峰位于橙红至红色区段。其摩尔消光系数约150,000 M⁻¹cm⁻¹，量子产率约0.15。该染料的光稳定性良好，适合长时间成像实验。

酮醛基团特异性标记综述

靶标来源：醛基在天然生物分子中并不丰富，但可通过多种方式人工引入。糖蛋白的糖链经高碘酸钠（NaIO₄）氧化，邻二醇结构断裂产生醛基；RNA的3‘端核糖同样可经氧化产生醛基；合成多肽可在N端引入丝氨酸/苏氨酸后氧化，或直接掺入含醛基的氨基酸。

反应条件：腙键形成通常在pH 5-7的弱酸性缓冲液中进行。偏酸性条件有利于质子化酰肼的亲核进攻，同时抑制氨基的竞争反应。反应时间通常1-4小时（室温）或过夜（4℃）。推荐使用磷酸钠、HEPES或MES缓冲液，避免Tris和甘氨酸（含游离氨基）。

腙键稳定性：腙键在中性至弱碱性条件下稳定，但在酸性（pH < 5）下易水解。若需不可逆连接，可进行还原胺化——用NaCNBH₃或2-甲基吡啶硼烷（pic-BH₃）将腙键还原为仲胺键。pic-BH₃对酸敏感底物更温和，是糖蛋白标记的优选还原剂。

纯化与验证：标记产物可通过透析、凝胶过滤或HPLC纯化。UV-Vis光谱确认Cy3.5特征吸收峰（~570 nm），荧光光谱测定发射峰和量子产率，质谱验证分子量变化。

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